[求救] 關於denature protein的方法

看板Biotech作者 (virgin)時間14年前 (2011/12/05 11:12), 編輯推噓1(105)
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各位版上的學長學姊們好, 小弟最近要進行IP的實驗, 我找到的抗體只能辨識denatured form的protein, 所以在進行IP之前,我必須要確保protein已經被denature了。 小弟用的sample是tissue的lysate, 在homogenize的時候是用RIPA lysis buffer,其中含有0.1% SDS, 想請問這樣的情況之下可以確保protein被SDS denature嗎? 如果不行的話,請問有什麼方法可以將lysate中的protein denature呢? google了一下好像沒有找到相關的protocol, 麻煩版上的學長姊幫忙解惑,小弟感激不盡! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.116.253.121

12/05 11:36, , 1F
你是要做protein-protein interaction還是修飾?
12/05 11:36, 1F

12/05 11:36, , 2F
pp interaction不能讓他們denature喔....
12/05 11:36, 2F

12/05 11:37, , 3F
真的找不到就建議你用fushion protein來做吧
12/05 11:37, 3F

12/05 11:38, , 4F
至於denature protocol有些IP的有寫 再找找看
12/05 11:38, 4F

12/05 17:01, , 5F
抗體加下去也會被denature吧 先透析說不定會折疊回去
12/05 17:01, 5F

12/05 17:02, , 6F
換個抗體會不會比較容易設計實驗?
12/05 17:02, 6F
文章代碼(AID): #1Et3QDPa (Biotech)