[求救] western blot加不同抗體的意義?

看板Biotech作者 (Linda*)時間12年前 (2011/12/03 23:57), 編輯推噓7(7推 0噓 13→)
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我至今還是搞不太懂western blot加不同一抗的意思＠＠ 我是實驗室初學者 查了書也看不懂 問老師這些太基本很怪唉 我做的實驗是某蛋白A會不會被另一個蛋白B磷酸化 然後老師用了很多不同種的抗體 在western blot 其中一些抗體是Anti-A或Anti-B 那這樣做出來的片子要怎麼看呢？ 如果有signal那是代表誰被誰磷酸化呢？ 那不是做一次就行了嗎？為什麼要加這多種抗體做很多次？ 真的是想不透這些抗體的作用。。 希望大家能幫助我：﹞ 謝謝～ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 109.175.170.93
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12/04 01:13, , 1F
不管被誰磷酸化 要壓磷酸化就應該是壓phospho-A吧
12/04 01:13, 1F
推
12/04 09:41, , 2F
不同ab全加下去，除非你們一抗只用一次，
12/04 09:41, 2F
推
12/04 10:42, , 3F
不同一抗會分開做 一起做怕互相干擾 有雜band也很難釐清
12/04 10:42, 3F
推
12/04 18:00, , 4F
看誰被誰磷酸化還要搭配inhibitor設計實驗
12/04 18:00, 4F
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12/04 18:02, , 5F
另外還要有protein間interaction的證據
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12/04 18:03, , 6F
另外跑WB的sample不是出自你手?
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12/04 18:04, , 7F
問問看sample的供應者怎麼設計實驗的
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12/04 18:07, , 8F
實驗設計其實是很高深的問題呀
12/04 18:07, 8F
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12/04 22:46, , 9F
我也有做過加inhibotor的！是說加了inhibitor的話就不會
12/04 22:46, 9F
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12/04 22:47, , 10F
有band了嗎(不會被磷酸化了)?
12/04 22:47, 10F
推
12/04 23:02, , 11F
如果你是碩士生, 不會, 還是快找人問清楚, 找老板最安全.
12/04 23:02, 11F
推
12/05 09:24, , 12F
WB有signal只能代表你的membrane有你要染的東西
12/05 09:24, 12F
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12/05 09:25, , 13F
至於為什麼要染這個東西主要還是實驗設計的問題
12/05 09:25, 13F
推
12/05 09:31, , 14F
就算加了inhibitor 也不一定是抑制到目標的上游
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12/05 09:32, , 15F
一切都要等data出來才有定論
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12/05 09:35, , 16F
你還要注意的是你的一抗是抗磷酸化的還是抗未磷酸化的.....
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12/05 09:36, , 17F
拿著你的實驗流程細節跟DATA找老闆或學長問清楚吧...
12/05 09:36, 17F
推
12/05 09:40, , 18F
不問旁邊的人跑來這問也很怪= ="
12/05 09:40, 18F
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12/05 09:41, , 19F
可以用同片膠剪兩邊就可以用兩種抗體了~
12/05 09:41, 19F
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12/05 09:49, , 20F
感覺很像新手卻被地雷老師趕鴨子上架 =.=
12/05 09:49, 20F
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