[求救] 生醫材料取細胞RNA方法的問題

看板Biotech作者 (jihher)時間14年前 (2011/11/22 11:20), 編輯推噓4(4推 0噓 6→)
留言10則, 5人參與, 最新討論串1/1
大家好, 我們實驗室是做生醫材料, 目前做到qPCR部分 我的實驗室生醫材料collagen內種細胞, 厚度5mm 大 想請問的是 一般取RNA都是 先把組織或生醫材料 用homogenizer或其他方法 搗碎 然後加入TRIZOL 做RNA extraction接下來的部分 我們老師提到用Proteinase K 這個東西去溶我的材料, 2小時 然後離心取細胞 請問這方法可行嗎, 會不會影響RNA ?? 感謝!! 發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.114.51.248 ※ 編輯: jihher 來自: 140.114.51.248 (11/22 11:21)
推
11/22 11:38, , 1F
PK 本身不會
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11/22 12:18, , 2F
所以此方法是可行的?
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11/22 15:13, , 3F
不過這樣子和你的treatment環境會有差
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11/22 15:43, , 4F
樓上指的是?? 後續取RNA的方法會跟TRIZOL的有差?
11/22 15:43, 4F
推
11/22 16:37, , 5F
因為你的細胞也被PK treat到了..可能會被argue影響?
11/22 16:37, 5F
推
11/22 21:42, , 6F
Proteinase K要在50度作用2小時 RNA恐怕會degrade了
11/22 21:42, 6F
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11/22 21:59, , 7F
假設你加藥二小時後收， 但你加了protease後要再兩小時
11/22 21:59, 7F
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11/22 21:59, , 8F
時間點就會有差異 RNA的表現也不一定是2小時後的表現了
11/22 21:59, 8F
推
11/22 23:21, , 9F
樓上正解 PK 本身不會影響 RNA 但是處理的過程時間與問度的
11/22 23:21, 9F
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11/22 23:21, , 10F
"溫度"的影響就難說
11/22 23:21, 10F
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