[求救] 細胞冷凍時medium變色

看板Biotech作者 (ss)時間12年前 (2011/10/16 16:54), 編輯推噓10(1007)
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很久之前在板上有問過關於細胞冷凍的方法 我們lab目前是仍然是這樣的,有4度/-20度冰箱 和液態氮 之前保存細胞時都是配好90%的DMEM+10%的DMSO 直接放到-20度 1~2小時 之後丟入液態氮 因為之前養的都是3T3,細胞保存密度約有2~5*10^6 /mL 每次解凍雖然沒有細數,不過總之就是細胞仍能健康繼續養的程度 後來在一本"組織工程" (徐善慧老師著)上 看到在液態氮管口放30分鐘就可直接凍入液態氮中的方法 不知道有沒有人試過? 因為最近養的細胞比較珍貴,很怕把他養死 想問的是,為什麼冷凍時medium有時會呈粉紅色,有時候會變成橘色或黃色? 如果變色,細胞會不會死掉?? 因為 1.在液態氮管口30分鐘的細胞,要放進去時變成鮮黃色,過段時間在看變有點橘 2.在-20度30分鐘,管口30分鐘在放進去的是粉紅色 3.在-20度1.5小時的也是粉紅色 不過,組1用的是分裝成50mL小管,50mL滿的medium(本來就偏橘) 組2.3用的是50mL小管中最後的5mL(本來就偏粉紅) 想請問板上的強者先進們這些現象是正常的嗎 如果我在一兩天之後解凍這些細胞,測試存活度,和一兩個月後解凍的效果是否相同? 有許多問題希望有人能回覆,非常謝謝!!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.182.185

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有一種可以放在液態氮桶口旋轉下降的凍細胞工具。
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我也發現同一批凍的細胞,從液態氮拿出來後顏色會不同
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但是解凍後沒有什麼影響. 細胞放在-20結凍後,盡量隔
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天就丟到液態氮桶裡,我有解凍過學姊放在-20半年的
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細胞...死一堆.所以是有差的!!(推眼鏡)
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因為一般都放-80
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一般應該是4→-20→-80→液態氮
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我們都放漸凍盒直接丟-80,隔天放液態氮
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天阿~我打錯了~ 我是丟-80....
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放漸凍盒再放到液氮裡是比較好的做法 提高存活率
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變色是不會影響 我們也有這種情形
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能夠不用isopropanol嗎 @@ 會死翹翹吧
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isopropanol不會跑到凍管裡阿 為什麼會死翹翹??
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或者現在有新型漸凍盒不用加isopropanol的
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XD 我的意思是能夠不用凍盒直接進冰箱嗎
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老師給我們的步驟是4度 30min→-20 2hr→-80 overnight
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→液態氮 然後...medium變色是ph值有變化了吧...
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文章代碼(AID): #1EcfkyjG (Biotech)