[求救] 限制酉每反應後band向上移??

看板Biotech作者 (紫色鳶尾花~)時間12年前 (2011/10/12 22:51), 編輯推噓2(2推 0噓 9→)
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請問大家~ 我的PCR產物片段大小是650bp 用KpnI(NEB)單切會切成兩段400和250bp H2O 3 10X Bfr 1 KpnI 1 DNA 5 total 10ul 反應37度C 3hr 但是最近遇到一個問題是 (之前都沒有發生過 其他酵素也沒有這種情況) 不管是PCR產物有無KpnI的切點 只要有加KpnI反應 電泳後，在原本650bp的band上方都會有一條淡淡band 原本以為是PCR產物可能有兩條很接近的band 但是經過確認後發現是single band 問題就是有加KpnI反應後，即使沒有切 就是會有多餘的band在上方~ 換了新酵素也是同樣的情形 請問大家是否有遇過類似的情形呢？ 先謝謝各位~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.27.164.222
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10/13 01:53, , 1F
是很近的貼在一起，還是有一段空隔呢？
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10/13 01:54, , 2F
另外，"酶"，這個字是可以打得出來的唷
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10/13 11:49, , 3F
本來650 kpnI處理後 變成 700和650
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然後kpnI有切的話 400那條上面會再多一條淡淡的500
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之前有碰過這種狀況，後來發現是跑膠的問題..
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10/13 14:59, , 6F
那時候是放切膠台照才知道其實是一個band，但它是斜的
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10/13 15:00, , 7F
所以立起來從上面照膠就像是兩個，不知道你是否也是這狀況
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10/13 18:05, , 8F
謝H大~~ 下次會看看是不是這情況~
10/13 18:05, 8F
推
10/17 19:34, , 9F
請參考物理學的光之折射效應
10/17 19:34, 9F
推
10/19 23:58, , 10F
映像中..transfer buffer 的MeOH含量提高有助於小分子
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10/19 23:58, , 11F
的transfer (10%~20%)
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