[討論] vector切完之後

看板Biotech作者 (伊諾)時間12年前 (2011/10/07 12:29), 編輯推噓4(4推 0噓 25→)
留言29則, 6人參與, 最新討論串1/1
昨天晚上切vector 因為只有一個EcoRI的切點 所以切了overnight 今天做了CIP 想請問如果沒有馬上做gel elution的話 放到星期一才純化可以嗎?? 另外,切vector後一定要跑長膠check嗎 還是短膠就可以了?? 謝謝~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.116.94.249
推
10/07 13:04, , 1F
要馬EDTA+heat inactivate，不然就先跑膠，晚一點elute
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10/07 13:14, , 2F
請問是膠的話就直接放在enpendoff裡加水保存就可以放久
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一點了嗎謝謝
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10/07 13:33, , 4F
過clean up然後保留在TE buffer比較穩吧(喔當然一定要65
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度C 讓酵素失活喔!!)
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應該說在你CIP處理完後就應該要讓酵素失活了@@
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10/07 14:31, , 7F
有喔,已失活了,只是在想需要跑很久的長膠嗎?學長說要六小
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時!
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不太了解為什麼要跑長膠耶?為了要check什麼?
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這方面我就不太熟了
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可能要讓你跑遠一點，比較不會切到未切部份吧
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elution的時候......。CIP完不處理也還好，切完再elution也
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樓上大大可以解釋一下嗎@@?
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可以～～他是DNA還蠻穩定的，冰冰箱就好了
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10/07 16:19, , 15F
跑遠一點是?
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就是你現在只切一刀，基本上片段很大，怕circular跟linear
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很近～～切膠可能會切到未被作用的質體，我猜的拉～～
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10/07 16:22, , 18F
不過長膠的意思是什麼我還真是不了解就是了...
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10/07 16:24, , 19F
因為其實切一刀感覺要從膠上看出來有無差異性我覺得很難><
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10/07 16:24, , 20F
所以我就偷懶的只跑了短膠,然後elute....
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推
10/07 16:26, , 21F
跑遠一點會比較保險拉～就跑一個未切一個有切，這樣比較好看
10/07 16:26, 21F
推
10/07 17:18, , 22F
要分circular跟linear其實跟跑的速度比較有關..
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10/07 17:19, , 23F
你電壓都開80 100v去跑 跑長膠也還是黏在一起
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10/07 17:19, , 24F
不過正確說法是 v/cm這比例 膠夠長 同電壓這比例就會降
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10/07 17:20, , 25F
好吧 其實定電壓下 跑長膠好像也是對的 (錯亂了 抱歉)
10/07 17:20, 25F
推
10/08 01:32, , 26F
另外以現代的EcoRI效率 切o/n之後應該不會再有沒切開的吧
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10/08 01:33, , 27F
我也想知道跑6hr長膠的目的是甚麼
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10/11 00:18, , 28F
據我之前問老闆的說法是，這個方法以前人蠻常用的
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10/11 00:18, , 29F
似乎是可以分circular跟linear form的vector
10/11 00:18, 29F
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