[求救] virus challenge以及bacmid system
大家好
目前在研讀一篇有關於利用bacmid system表現EV71之VP1的相關paper
有些東西查了好久了 卻一直找不到自己可以信服的解答
想向大家請教!
首先是不知道台灣除了國衛院以外哪裡有P3以上的實驗室...?
也就是可以做對小鼠進行virus challenge的實驗的地方
(印象中之前環安衛課程有上過 但是書不見了...)
接著
在許多文獻中都會讀到 小鼠只有在哺乳期可以被EV71感染
當成年之後就會對這個病毒有抗性
我不太懂的地方是是什麼原因造成幼鼠和成鼠對於相同的一個病毒會有不同的抵抗能力?
再者
我在bacmid(baculovirus shuttle vector)的部分
(以下是他的使用手冊 我在幾個頁數有些問題...)
http://tools.invitrogen.com/content/sfs/manuals/bactobac_man.pdf
在donor plasmid的地方
在手冊中第59 60 頁中有提到pFastBac HT A上面具有一個TEV recognition site
是用來讓AcTEV protease將N端的tag清掉的
我想問的是這個protease的來源是baculovirus?還是一般昆蟲細胞裡面有?
另外我看不太懂上面說要來把他清掉的目的...
不知道有沒有曾經做過這個實驗的同學老師們可以稍為為我講解一下......
最後是一個有關於病毒的問題
bacmid所製做出來的baculovirus 據資料所說是可以進入哺乳類細胞中的
若現在將於昆蟲細胞中表現的promoter polyhedrin
置換成能夠於昆蟲細胞和哺乳類細胞都大量表現的promoter
(如上面paper選用的WSSV Pie1 一個極早期的promoter)
以下是我的預測結果...(promoter置換後)
可以進行表現 產生蛋白質(因為會進入細胞)
但是並沒有辦法進行複製(因不會崁合入宿主DNA中)
其實這個推論比較像是我自己希望的結果...
對這個置換promoter還有另一個問題
原本Ppolyhedrin是桿狀病毒為了在晚期表現polyhedrin形成occlusion body而存在
現在若是改變了一個promoter
將他換成上述的WSSV(蝦白點病毒)的promoter ie1(極早期promoter)
這個基因啟動的時機會因此而改成桿狀病毒感染後的極早期嗎?
關於病毒promoter的方面一直有些問題尚待釐清
一個比較基本的問題
當我們說一個病毒可以感染A生物體(如桿狀病毒之於昆蟲細孢)
意思主要是他有辦法利用A生物體內的聚合酶進行複製
但若將該病毒換到不同種的B生物體(如將桿狀病毒轉移到哺乳類細胞)
沒辦法進行複製的原因是因為這個病毒沒有辦法利用B生物體的酵素嗎?
若是
那不能使用酵素的原因可能是.....
抱歉...問題稍多...
而且想一想新的問題就又飄出來...
希望有機會可以釐清
麻煩各位了 有任何資料缺失會立刻提供!
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