[求救] 用96孔盤做MTT assay

看板Biotech作者 (只有手指了解女生的寂寞)時間14年前 (2011/10/01 15:26), 編輯推噓2(2推 0噓 10→)
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想請問各位實驗室用96孔盤做MTT是很常見嗎?? 因為我們家實驗室最近改用96孔盤來做MTT assay 可是這幾次實驗下來數據都不太好... 之前的做法是將 "sample做成適當的大小放入24孔盤" 中 每個well seeding 5000顆細胞 時間點 1.3.5.7.9 天 每個時間點加入MTT反應完都會有明顯的藍紫色結晶 再加DMSO之後測570nm的OD值最高都會有2左右 可是現在做法換成將 "sample浸泡在medium裡24小時後當萃取液" 先在96孔盤中 每well seeding 6000顆 "培養24小時後換成萃取液" 時間點也是1.3.5.7.9天 可是當加入MTT反應完之後都沒有藍紫色結晶出現 DMSO加入後的顏色也很淡... 570nm測出來的OD值都0.2左右 跟之前比較實在差很多 想請問說 1.以96well的大小培養細胞 大概幾天就會長滿?? 我實驗的時間點是否過長? 2.另外我用雙氧水來當作positive control 來殺細胞是否OK? 還是有其他更適合的藥物?? 請大家多多指教 感謝~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 203.71.94.5
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第一個問題 因該要看是什麼細胞吧...
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時間是否過長 因該看你實驗目的為何吧
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推
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有沒有用顯微鏡觀察細胞呢？
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培養液換成萃取液的過程有沒有做會讓細胞大量流失掉的動作
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細胞株是MG-63 平常10cm dish 大概3-4天繼代
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時間點做長是想看細胞從少到多 再來就是滿了之後開始死
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亡的曲線
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24well只種5000太少了吧 96種6000到是太多了
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若要培養長達9天還是改回24Well 5000細胞吧
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我們都是用96在做MTT..有一點你要注意的是細胞數。
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像我實驗的細胞可以到50000顆，要先知道你用什麼細胞。
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推
10/03 17:53, , 12F
細胞數要看細胞株而決定 我們是細胞貼了之後就做處理耶
10/03 17:53, 12F
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