[方法] 增加PCR產物濃度

看板Biotech作者 (soul777)時間14年前 (2011/09/17 19:35), 編輯推噓4(4推 0噓 10→)
留言14則, 10人參與, 最新討論串1/1
最近做抽組織RNA在轉CDNA作PCR 不過PCR的結果band都很淡不足以分析 不知各位有沒有遇過類似的狀況 目前想到解決的方法是 1.改變抽取RNA方式提高RNA的品質 2.改變RT的條件 3.改變PCR cycle數? (以上只是方向還沒想到方法) 目前試過把CDNA濃縮再去PCR 不過結果並沒有改善 請各位我多點意見 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.14.203.184
→
09/17 20:02, , 1F
有可能本來表現量就少..你是要Elute PCR product的嗎？
09/17 20:02, 1F
→
09/17 20:13, , 2F
嗯 已經該組織表現亮就較少 但要如何提高band亮度呢
09/17 20:13, 2F
→
09/17 20:13, , 3F
band很淡的原因有很多種啦..要看你目前操作方式才能改進
09/17 20:13, 3F
→
09/17 20:14, , 4F
是有要做cloning嗎？還是只要看到band就好呢？
09/17 20:14, 4F
→
09/17 20:15, , 5F
目前只要提高band亮度就好
09/17 20:15, 5F
→
09/17 20:30, , 6F
有也可能是這個product不管怎麼做最多就是這麼亮...
09/17 20:30, 6F
推
09/17 21:24, , 7F
增加cycle
09/17 21:24, 7F
→
09/17 21:58, , 8F
從原本的PCR吸一點出來再跑一次PCR~~
09/17 21:58, 8F
推
09/18 10:38, , 9F
樓上這招沒試過
09/18 10:38, 9F
→
09/18 14:56, , 10F
我試過可行，或許原po可試試看~~
09/18 14:56, 10F
推
09/18 22:46, , 11F
1.annealing時間拉長一點 2. 原本的pcr取一點再pcr
09/18 22:46, 11F
推
09/19 00:17, , 12F
金魚大那招可行 不過就只有cloning或定序等要提高量才能用
09/19 00:17, 12F
→
09/19 12:46, , 13F
用金魚大的方式,base錯誤率會不會有跟著上升的問題?
09/19 12:46, 13F
→
09/20 11:57, , 14F
PCR cycle數太高會有雜訊,RT用的RNA量多一點試試
09/20 11:57, 14F
‣ 更多 soul777 的文章
文章代碼(AID): #1ET8NfPZ (Biotech)