[討論] Koazk sequence

看板Biotech作者 ( )時間12年前 (2011/09/15 16:48), 編輯推噓3(3推 0噓 1→)
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各位先進大家好 最近在做蛋白的deletion mutant 因次想要把不同的片段大小的蛋白clone出來 我想要問的是 不同片段大小的蛋白要表現的時候 需要在這些蛋白的前端加上 Kozak sequence嗎?? 我所要用的plasmid是pCMV-tag 4這個plasmid 這個plasmid 是有一個CMV promoter但其MCS中並無 ATG site 所以我在clone的時候需要幫這些不同的片段加上Kozak sequence嗎?? 謝謝!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.116.1.134
推
09/15 17:14, , 1F
MCS中怎麼會特地做ATG？Kozak只是相對，並不絕對需要其實。
09/15 17:14, 1F
我是在pCMV tag3中看到在Myc tag前面是有一個Kozak sequence 而tag3和tag4的差異是在於tag所接的位置 tag4是接在蛋白的後端 而CMV promoter的後方馬上就是MCS region 沒有這個序列不會引想到蛋白質的表達嗎?? 若是沒有這個序列 CMV promoter之後他如何得知那一段序列是我要的 這樣就會導致我的reading frame shift了吧!! 所以我想說是否要給他這個序列 還是說只要在我的蛋白的前方給他個ATG即可!! ※ 編輯: tank415 來自: 140.116.1.134 (09/15 17:24)
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09/15 18:04, , 2F
我覺得比較需要注意的是要記得去掉stop codon 如果想要tag
09/15 18:04, 2F
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09/15 18:05, , 3F
kozak裡有含ATG 如果deletion少掉ATG就要補
09/15 18:05, 3F
推
09/15 18:06, , 4F
所以你的蛋白前面沒有start codon？況且這是fusion阿
09/15 18:06, 4F
沒錯 我要做的蛋白裡面是沒有start codon的!! 所以我才會想要加 Kozak sequence!! ※ 編輯: tank415 來自: 58.114.142.76 (09/15 23:33)
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