[求救] western 反白現象

看板Biotech作者 (雪拉貝瑞)時間13年前 (2011/08/11 01:07), 編輯推噓3(3推 0噓 9→)
留言12則, 6人參與, 最新討論串1/1
我是使用NBT & BCIP的染色呈色方式 一抗濃度是1:1000(5ml稀釋液中加入5ul的抗體) 室溫處理兩小時 二抗是兔子血清同樣濃度 室溫處理45分鐘 放入呈色液中搖晃至出現預期產物 但是我的蛋白質產物都呈現反白的現象發生 因為Marker正常是以推測應該是一ˋ二抗的問題 麻煩大家幫我看看問題在哪邊 謝謝大家了 下面是我的Western圖片 http://imageshack.us/photo/my-images/691/tic55abtestdry.jpg/ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 203.72.87.85
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08/11 01:43, , 1F
參考看看AbCam http://ppt.cc/w(lv
08/11 01:43, 1F
推
08/11 03:28, , 2F
反白就是反應太強 應調整（降低） 一 二 抗濃度
08/11 03:28, 2F
推
08/11 11:38, , 3F
一抗太強了 調整一下就會改善
08/11 11:38, 3F
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08/11 12:07, , 4F
那麼降低的量應該是要多少比較好呢?沒有辦法一直嘗試..
08/11 12:07, 4F
推
08/11 12:09, , 5F
PBST沒加tween20
08/11 12:09, 5F
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08/11 15:55, , 6F
抗體不做titration嗎...
08/11 15:55, 6F
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08/11 16:41, , 7F
PBST是Wash時用的TBS buffer嗎?我有加1% tween20
08/11 16:41, 7F
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08/11 16:42, , 8F
titration??對不起我不太清楚您的意思...
08/11 16:42, 8F
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08/11 16:43, , 9F
我的稀釋液為1%BSA 0.05%tween20in TBS buffer
08/11 16:43, 9F
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08/11 16:44, , 10F
抗體單純就是血清和甘油1:1
08/11 16:44, 10F
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08/11 21:10, , 11F
有看過沒配好的TBS，因為滅菌後沒加TWEEN20跑出來很像這樣
08/11 21:10, 11F
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08/12 01:51, , 12F
抗體濃度就是自己要踹 沒有別招吧
08/12 01:51, 12F
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