[求救]細胞染色時細胞容易脫落

看板Biotech作者 (小黑豬)時間14年前 (2011/08/01 11:42), 編輯推噓3(3推 0噓 7→)
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我使用的細胞是平滑肌細胞，將細胞處理過後使之貼附於fubronectin上約兩小時。 PBS was後以formalin固定，再以PBS wash兩次後以0.1% triton x-100打洞，再以PBS wash兩次，之後以phalloidin染色一個小時，再以PBS wash三次。我的細胞是種在 24-well。結果細胞掉落的相當嚴重。我確定我在清洗的時候相當小心。 請教有沒有好方法（或小技巧）可以改善細胞脫落的情形。謝謝！ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.116.61.31
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08/01 12:45, , 1F
fibronectin....
08/01 12:45, 1F
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08/01 12:47, , 2F
原來真的有fubronectin 抱歉XD fix與打洞時間減少試試看！
08/01 12:47, 2F
推
08/01 13:42, , 3F
coating poly-lysine有幫助嘛!?
08/01 13:42, 3F
推
08/01 15:31, , 4F
PBS加Ca有幫助嗎?
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08/01 16:13, , 5F
已經coat fibronetin，在加上poly-L-lysine有點怪.....
08/01 16:13, 5F
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08/01 16:15, , 6F
請問有人試過PBS+Ca+Mg在細胞染色可防止細胞掉落嗎？
08/01 16:15, 6F
推
08/01 16:38, , 7F
PBS+ 1mM CaCl2 + 0.5mM MgCl2 pH=7.2 試試看吧！
08/01 16:38, 7F
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08/01 16:39, , 8F
Ca2+ 與 MgCl2+ 似乎可以增加 cell adhesion
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08/01 16:39, , 9F
多打了Cl
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08/04 15:57, , 10F
謝謝，使用PBS + Ca + Mg真的有比較好。
08/04 15:57, 10F
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