[求救]in vitro transcription

看板Biotech作者 (查無此人)時間13年前 (2011/07/27 00:15), 編輯推噓0(0推 0噓 4→)
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最近在做 T7 及 Sp6 in vitro transcrption 可是產生出來的RNA 有的時候會出現2條以上的BAND 有實會出現比預期大小 大出很多的產物,請問版上大大 有人有遇過類似的問題嗎?? 我的條件 DEPC ddH20 1ug 5' overhand template DNA NEB RNA pol 10x buffer 80XrNTP RNasin T7 or Sp6 pol 總反應體積為5Oul 有時為了獲得大量RNA 會將所有東西等比例放大(EX: X3倍) 再分成每管50ul 共3管進行反應 T7於 37度反應3小時 Sp6於40度反應3小時 謝謝各位大大幫忙 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.97.162
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污染？
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template是plasmid or PCR product?
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如果是plasmid有可能是沒切乾淨才會有大很多的product
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PCR沒純化的話，也可能由template做出
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