[求救] 1.5% TAE agarose 跑DNA W形狀的band?

看板Biotech作者時間14年前 (2011/07/04 13:58), 編輯推噓7(7015)
留言22則, 9人參與, 最新討論串1/1
就正常跑Cloning步驟PCR完的產物 想要是1383nt的band 但跑出一個W形狀的band http://imageshack.us/f/202/25553467.png/ 請問有人知道這樣大小要如何判斷嗎? 可能是什麼原因造成這樣的band呢? overloading? [ion]過高? 100 Volts過高? 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.121.97

07/04 14:23, , 1F
overloading比較有可能~你buf是新的?!
07/04 14:23, 1F

07/04 15:12, , 2F
嗯 剛好是新的 而且同塊膠也有同時跑其他PCR產物 很正常
07/04 15:12, 2F

07/04 15:14, , 3F
然後我有減半跑 這次就恢復正常 只是還是想知道原因^^"
07/04 15:14, 3F

07/04 15:37, , 4F
這marker.... 確定膠沒問題?
07/04 15:37, 4F
這是第一次跑和後來減半跑的DNA pattern http://imageshack.us/f/684/89384811.png/ 兩次都是同樣的Sample, tank, buf, date, 並為同一批gel 然後也剛好都有學姐在我loading的同一塊膠一起跑其他pcr產物 (RT-PCR 100~200nt + 100bp marker) 看起來量減半跑以後band就整齊多了 不過比較有疑問的地方是: 1.旁邊學姐跑的情況似乎都正常,為何我的gel一邊不正常一邊正常 2.為什麼我兩次跑的膠 DNA pattern差很多? 請問大家意見 謝謝 ※ 編輯: ararthur 來自: 140.112.121.97 (07/04 16:21)

07/04 21:15, , 5F
等一下... 2張的marker都不是我能接受的正常範圍...
07/04 21:15, 5F

07/05 00:28, , 6F
marker怎麼都糊成一團!!
07/05 00:28, 6F

07/05 10:56, , 7F
會是focus還是gel的問題?
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07/05 10:57, , 8F
還是1.5%跑全速的問題
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07/05 13:09, , 9F
我覺得是gel問題
07/05 13:09, 9F

07/05 13:37, , 10F
還是overload 再減半跑看看 連marker都要減半阿
07/05 13:37, 10F

07/05 16:22, , 11F
我1.5%跑100V不會這樣 再配全新的膠跟buffer試看看...
07/05 16:22, 11F

07/05 16:23, , 12F
小well marker差不多3ul就夠了...
07/05 16:23, 12F

07/06 19:29, , 13F
同意~marker也太糟了,我都懷疑是不是快壞掉了,才有那麼多
07/06 19:29, 13F

07/06 19:31, , 14F
smear...然後量真的下太多了...你的marker膠用1%應該比較合
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07/06 19:31, , 15F
適...雖然我也用過1.5%沒發生這種情形
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07/06 19:33, , 16F
然後建議你可以再跑遠一點,然後看起來你的大小沒很大,要不
07/06 19:33, 16F

07/06 19:34, , 17F
要100bp~3kb的marker,膠用2%(1.5%應該也可)
07/06 19:34, 17F

07/08 06:37, , 18F
覺得是buffer的問題 不然就是gel 其實1.3K跑0.8%就夠了吧
07/08 06:37, 18F

07/08 14:11, , 19F
嗯 其實只是剛好有1.5%的膠拿來跑而已XD
07/08 14:11, 19F

07/24 12:45, , 20F
我也認為全部都是加太多量的sample
07/24 12:45, 20F

09/13 16:30, , 21F
回來解答 後來發現是本LAB換了safe dye的緣故
09/13 16:30, 21F

09/13 16:30, , 22F
如果是用EtBr或是其他廠牌的就不會了
09/13 16:30, 22F
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