[求救] 利用Dot-Blot或Western等方法進行醣類免疫分析是否可行

看板Biotech作者 (狼凰慈威)時間14年前 (2011/06/21 10:44), 編輯推噓2(2推 0噓 17→)
留言19則, 2人參與, 最新討論串1/1
想請問一下關於醣鏈要如何進行免疫檢測實驗的問題 因為最近我們需要測試一株抗體是否會認Sialyl Lweis x系列醣鏈 http://en.wikipedia.org/wiki/Sialyl_lewis_x 原本是使用Dot-Blot的方式 可是效果似乎不好 查了才發現我們用的PVDF membrane (0.45um)似乎孔徑太大 它建議的使用範圍是10-20kDa大小蛋白質 而另外一款(MILLIPORE Immobilon-PSQ 0.2um)建議的是<10kDa 但是我們的醣分子量只有820左右 離10kDa也是一大段距離 感覺也是會穿過去 想請問一下有在做醣類實驗的前輩們 一般進行這樣的實驗是使用什麼方式來進行? (感覺ELISA的96 well盤可能也coat不太上去??) 大恩大德先謝過了! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 203.71.94.31
推
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DAS ELISA?
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06/21 23:59, , 2F
似乎可行 不過必須要有兩種不同但都可辨認相同醣的一抗
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不然negative control會出現false positive(二抗會直接
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接上第一層coating的一抗) 可惜目前我們只有一種一抗
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serum多放一點? 不然一抗直接接ap?
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而且elisa的靈敏度又沒有RTPCR那麼高 同時也是優點
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我們的醣是買來的純醣溶於水中 再另外用抗體去認(基本
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上就是在做western只是把蛋白質換成醣) 所以跟serum無
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關喔 而且更不會牽扯到RTPCR @@" 現在遇到的問題只是
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醣比蛋白質小很多 所以用一般western的方法會穿過PVDF
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06/22 18:24, , 11F
PCR是題外話 一抗直接接enzyme做detection?
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06/23 00:31, , 12F
嗯 基本上就是DAS-ELISA的方法了 的確是可行 不過目前
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手邊現有的一抗只有一種 看來可能得找找有沒有其他同樣
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能認SLeX醣的不同一抗 或直接在現有一抗接上enzyme的方
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法了... 感謝您的回答與幫忙 :)
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不過話說回來 如果能直接找到超小孔徑的membrane問題就
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直接解決了 :p 可惜目前找到最小的也是0.2um...
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推
06/23 08:34, , 18F
JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, Apr. 1982, p. 737
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06/23 22:07, , 19F
感謝!! 來去研究看看 :)
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