[求救] RNA純度太低

看板Biotech作者時間13年前 (2011/06/05 22:35), 編輯推噓4(4推 0噓 18→)
留言22則, 7人參與, 最新討論串1/1
第一次在這邊發文 如果格式有問題的請不吝指教 今天抽RNA時(用REZOL)因為我的細胞量少，大約只有8*10^5，所以REZOL加了大約100ul 接著加入約20ul的chloroform靜置後離心取上清液 接著加isopropanol靜置半小時以上，THEN 離心去上清液 在所有sample中某一管的純度A260/A280只有1.53左右，其他大約都在1.7附近 現在不知道RNA純度1.5左右可不可以繼續做RT 請各位不吝提供經驗指教，謝謝~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 111.250.13.90 ※ 編輯: starjim 來自: 111.250.13.90 (06/05 22:35)
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我們實驗室是以跑膠看到shape band為能夠繼續做RT的標準
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RNA純度應該是>2.0 所以你的sample可能有DNA或protein殘留
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不過如果之前1.7左右都OK 那只要RNA quality好應該就OK
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推
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還是可以做
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推
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一搬rtpcr其實沒差
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想請問純度會影響到後面轉cDNA和PCR後的跑膠嗎?
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那純度是會影響後續哪個部分?
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推
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你可以試試看阿 我以前1.5左右還是照用...
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usehot acid phenol extraction again
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推
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1.7以下我就不用了耶 可能有雜質
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那請問我如果做再次純化的話會比較好嗎?
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其實我覺得用這種抽法的話，因為細胞量少而減少REzol的
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使用量並不會比較好抽，因為如果你用的是一般的1.5 ml
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微量離心管，最後上清液會非常「薄」，很容易取到中間介
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面層，就會容易吸到DNA或protein。
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我建議如果下次還要做，還是用1 ml的REzol + 200 ul的
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氯仿，畢竟至少200 ul的上清液其實相對較好吸取
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而且比較可以不怕吸到中間層，不用擔心細胞太少的問題
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RNA的濃度決定在你最後的回溶，而不是一開始REzol加的量
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我有加過比較多量的REZOL~可是離完心後上清液變的不透明
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會有點粉紅色的REZOL的顏色
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要不要試著離久一點，我抽100萬顆還是用1c.c.也沒啥問題
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