[求救] ITC來判斷interaction

看板Biotech作者 (SPEC)時間14年前 (2011/05/25 18:50), 編輯推噓2(2推 0噓 8→)
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請問通常拿來titrate的蛋白 濃度最高試到多少才決定這兩個蛋白沒有interaction 有看過試到 1 mM的 真有這個必要嗎 通常大家使用到多高濃度為止就判斷兩者有interaction呢 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 111.240.101.48
推
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濃度算是case by case
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05/25 19:26, , 2F
從每一次titration的趨勢,基本上能看出有無interaction
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濃度設定太高或太低 fitting出來的data會不太準
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也不太好看就是
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05/25 19:36, , 5F
你用的是itc200的話,大致預測Kd value
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05/25 19:37, , 6F
他會幫你去預設在cell及syringe中合適的濃度
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05/25 19:42, , 7F
題外話 你用vp-itc的話,1mM protein放cell要1.5ml
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05/25 19:46, , 8F
多作幾次ITC,光純化protein就不知道要純化多久
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05/25 19:57, , 9F
我遇過的case,uM就夠了.滴過非protein,才有用到mM這麼高
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推
05/25 19:58, , 10F
推樓上 ITC要成功要建立在你有超多protein的基礎上
05/25 19:58, 10F
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