[討論] promoter+first exon fusion GUS ???
本來實驗室將我們的promoter(-1 ~ -1500 bp) fusion GUS
但轉殖後看不到GUS表現
老師和其他老師討論後
叫我在promoter後接上該gene的first exon 和 first intron再fusion GUS
剛剛在板上爬了一下文
的確有看到first exon上也可能會有調控transcription的region
但這樣接的話後面的GUS還會inframe嗎???
我是用pCAMBIA1301將我們的promoter置換掉本來在GUS前的35S promoter
本來promoter後直接是GUS 所以接進去不用管是否inframe
就是從GUS的ATG開始轉譯出蛋白質
現在加上first exon(有自己的ATG)和intron長度如果不是剛好3的倍數
GUS不就整個出不來了....
就算是3的倍數 我們也不知道從接的cutting site到GUS的ATG中間又有幾個base啊...
如果要用這個方法
是否就要從first exon的ATG開始 到GUS的ATG都要inframe才行???
而GUS前面多了將近90個胺基酸還能執行原本的功能嗎????
老師是說這些construct應該都是只會認GUS的ATG
不然有些promoter上也有ATG怎麼辦
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