[求救] 蛋白質表現很低

看板Biotech作者 (..)時間14年前 (2011/05/24 17:21), 編輯推噓3(3推 0噓 7→)
留言10則, 5人參與, 最新討論串1/1
各位前輩們好 小弟我卡在蛋白質表現量低好一陣子了 protein是接在pRSET-B帶有 his-tag 送進去 BL21(DE3)作表現 條件是37度的culture，OD 0.4 ~ 0.6 + 1mM的IPTG induction 一開始小量表現量正常，之後再重新養菌以同樣條件下去作 我要的蛋白質表現量越來越少，到現在幾乎是沒有了 由於實驗目的需要的蛋白質量要到mg等級的量 想請問各位前輩有什麼解決的方法 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.117.91.9
推
05/24 17:32, , 1F
有很多種方法...但都不一定有用...
05/24 17:32, 1F
→
05/24 18:25, , 2F
會越來越少 就只好再從前面表現正常的stock畫菌出來養了
05/24 18:25, 2F
推
05/24 18:49, , 3F
可能是菌loss掉plasmid
05/24 18:49, 3F
→
05/24 19:00, , 4F
有考慮過菌loss掉我要的東西，重新transform表現量
05/24 19:00, 4F
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05/24 19:00, , 5F
一樣很低 @@
05/24 19:00, 5F
推
05/24 21:39, , 6F
看LB IPTG 和抗生素有沒有問題
05/24 21:39, 6F
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05/27 14:57, , 7F
你是指隨著繼代太多次後而變少還是隨著induction時間越長
05/27 14:57, 7F
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05/27 14:59, , 8F
而逐漸變少(跑膠看)?請確保stock多凍幾管不要一直繼代，還
05/27 14:59, 8F
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05/27 15:00, , 9F
有我覺得你可以多試不同induction，如溫度降至30,25,28度、
05/27 15:00, 9F
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05/27 15:01, , 10F
試不同induction時數、start OD、或是換表現buffer...etc
05/27 15:01, 10F
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