[求救] blunt-end ligation

看板Biotech作者 (..)時間13年前 (2011/05/21 21:54), 編輯推噓4(407)
留言11則, 6人參與, 最新討論串1/1
我有試過不同比例的 ligation 我在做 blunt end ligation 時 若也要用 ciap treat 來防止 self ligation 我的步驟如下 其中比較有問題的是 1. RE digest 1. 可以在 digest 完,先加 klenow 然後 2. gel extraction 再 gel extraction 嗎 3. add klenow fragment 2. 如左邊步驟,加完 klenow 後可以不用 clean-up ,直接加 ciap 嗎 4. clean-up 3. ciap 完後應該不用 clean-up了吧? 5. ciap treat 6. ligation 不知道有沒有大大可以告訴我你們做過的經驗呢,謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.79.51

05/21 22:54, , 1F
insert也去磷酸根嗎? 一般只去vector的喔
05/21 22:54, 1F

05/21 22:57, , 2F
喔 是的 只有vector 去磷酸根 insert沒有
05/21 22:57, 2F

05/21 23:12, , 3F
ciap後不去除會影響ligation吧?
05/21 23:12, 3F

05/21 23:33, , 4F
咦? 樓上說得好像是真的吼? 因為這樣INSERT也會影響到??
05/21 23:33, 4F

05/21 23:47, , 5F
http://0rz.tw/jIrbF NEB cloning guide
05/21 23:47, 5F

05/21 23:55, , 6F
感謝樓上的連結~ 原來在ligation真的要純化耶
05/21 23:55, 6F

05/21 23:55, , 7F
05/21 23:55, 7F

05/22 00:04, , 8F
要弄乾淨阿... 不要偷懶...
05/22 00:04, 8F

05/22 00:06, , 9F
是 樓上大大說的是 不過其實我不是怕麻煩 我怕DNA量太少
05/22 00:06, 9F

05/22 07:40, , 10F
我CIP和RE一起加耶~量和作用時間就是看說明書寫的方式~
05/22 07:40, 10F

05/23 18:27, , 11F
不純化CIP會連你的vector一起去磷酸 難怪接不起來
05/23 18:27, 11F
文章代碼(AID): #1DryGkex (Biotech)