[求救] 紅血球做免疫螢光染色一直卡關

看板Biotech作者 (Mr.Big)時間13年前 (2011/05/18 17:12), 編輯推噓0(0推 0噓 6→)
留言6則, 3人參與, 最新討論串1/1
不好意思，因為並非生物背景， 因為要補data印證AFM結果， 所以必須作紅血球的免疫螢光染色， 目標物是細胞骨架～ 我先把步驟po上，請各位專家幫我看看哪裡出了問題。 1.將分離後的紅血球以0.5% Formalin-PBS固定 2.用PBS wash x2 3.以0.1% Triton X-100-PBS 打洞 4.用PBS wash x2 此時我就遇見了問題， 因為紅血球也是懸浮細胞， 所以我易開使都是在試管中做， 經由離心wash，會出現RBC pellet~ 但是當我加了X-100後，離心wash後卻沒有pellet存在.... 請問我是哪步驟做錯了? 其實我看了paper試了很多方法， 從一開使3.7% Formalin-PBS會讓RBC結塊....整個不能用 或者是不加Formalin-PBS，直接加X-100....也不行 可否請各位有做過血球染色的專家幫幫忙～ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.11.175
→
05/19 09:12, , 1F
可以先用cytospin打到玻片之後,再往下做IF.
05/19 09:12, 1F
→
05/19 09:13, , 2F
我白血球是這麼做,紅血球我就沒試過了
05/19 09:13, 2F
→
05/20 02:43, , 3F
或許可用血液抹片 大部分是紅血球 但不知是否適用於螢光染色
05/20 02:43, 3F
→
05/20 15:28, , 4F
try了cytospin~還不賴。另一問題出現，加了X-100後...
05/20 15:28, 4F
→
05/20 15:29, , 5F
在OM下卻都看不到RBC.....是什麼問題呢？X-100的問題？
05/20 15:29, 5F
→
05/21 10:32, , 6F
我是用methanol固定加打洞,沒試過X-100.
05/21 10:32, 6F
‣ 更多 macicine 的文章
文章代碼(AID): #1DqusAC1 (Biotech)