[求救] 請問Random primer的設計...

看板Biotech作者 (Phil-Ku)時間14年前 (2011/05/18 10:58), 編輯推噓3(3推 0噓 3→)
留言6則, 3人參與, 最新討論串1/1
最近在clone一個大小約5000bp的gene，但設計了兩三次不同的primer 或是用不同的Taq，始終只能Amplify出大概2000bp大小的band 跟同學討論的結果，可能是因為我們的方法是cell line的mRNA轉cDNA時，用oligo dT RT的步驟做不完全長，所以她建議用random primer去做RT 想請問一下大家，這種primer是去買廠商製備好的(像是Promega是她推薦的) 或是可以自己請明欣或是基龍米克斯合成呢？(因為經費不太夠) 而大家有經驗用來cloning長片段的基因嗎？效果如何？ 感謝大家^^ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.121.97
推
05/18 12:09, , 1F
hexamer跟commercial買就好啦~
05/18 12:09, 1F
推
05/18 19:29, , 2F
如果只是要Clone一個基亞，因去設計一個10bp以內的specific
05/18 19:29, 2F
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05/18 19:30, , 3F
primer 去做RT，效果會比random primer跟dT好，又更長！
05/18 19:30, 3F
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05/18 19:31, , 4F
基亞，因=基因(打太快，請去掉"亞，")
05/18 19:31, 4F
推
05/19 23:29, , 5F
這種Random primer 和 siRNA 的序列 我們lab都是請QIAGEN
05/19 23:29, 5F
→
05/19 23:29, , 6F
原廠來設計的也..因為一定做的出來..效果也非常好!
05/19 23:29, 6F
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