[求救] WST1測細胞IC50數值不穩定

看板Biotech作者keemun (冬天喝一杯熱熱的紅茶..)時間14年前 (2011/05/13 16:56)推噓1(1推 0噓 4→)

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最近用WST-1 (Biovision)測細胞加藥後的IC50 cell:懸浮性的HL60血癌細胞 protocol: 1. 在96well中加入80ul/well 細胞液 2. 加藥,藥物體積均以medium調整至20ul 3. 至特定時間點準備收細胞,直接加入10ul WST-1溶液/well 4. 0.5-4hr 每隔1 hr測OD440 Result: 1. 數值不合理,有時低濃度組的存活率比高濃度還低 2. 數值不穩定,三重複的跳動性很大 (不是pipette使用問題) 3. 數值不夠高？有時未加藥細胞WST-1反應4hr值才0.6左右 Question 1. WST1反應的合理OD值可到多少? 爬文看到OD約為0.2-2,我的值0.3-0.6可用嗎?需要調高細胞數嗎? 2. 96well是否體積太小? 若用24well或well要如何節省WST-1的用量? 這個藥不便宜說.....每個rxn約5元但是...我們一次至少測6個濃度x3重複x2~3個時間點x無數組藥 Orz 有想過改用MTT,但是想到這麼多組別的離心......冏請有使用經驗的人不吝指教,我會衷心感謝您的!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.128.67.244

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blence

05/13 17:26, , 1^F

05/13 17:26, 1^F

有的,每組數值先經過以下處理 OD440-OD650-cell free control 不過文章內提到的OD值為原始OD440

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blence

05/13 17:28, , 2^F

05/13 17:28, 2^F

每個well控制在 DMSO 1%以下,加藥濃度過低的組我想DMSO已遠低於1%所以沒有控制

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blence