[方法] Ecoli 電穿孔的方法

看板Biotech作者 (酷吉社爸..徵媽中)時間13年前 (2011/05/10 18:14), 編輯推噓9(9推 0噓 10→)
留言19則, 11人參與, 最新討論串1/1
各位前輩大家好 小的我最近開始用Bio-Rad Gene Pulser 做transformation (菌種 E coli DH5alpha and BL21) 由於實驗室之前做的學長姐都離開了~他們是用來做yeast 老師又要我開始用它來做 E coli的transformtion 我看了Bio-Rad對於 E coli轉殖方法的手冊 上面說強度要開到2.5KV 30uF 但是~我上次這樣做的時候~發生電流無法穿過去~ Actual Voltage 是0.1 KV ~當場傻眼!! 而且電完之後~菌液變透明!!學長說~電壓開太強~但他也不知道該開多少 勝任細胞的做法也是依照手冊上保存在10%甘油冰在-80度冰箱 一直都做不出來~~老師每天都對我說加油~~ 我也快受不了啦~~~!! 跪求各位前輩提供點意見~!!這樣比較有方向!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.113.77.224
推
05/10 18:46, , 1F
用CaCl2法！
05/10 18:46, 1F
→
05/10 18:52, , 2F
我也想用CaCl2~可是要做兩邊的比較!!
05/10 18:52, 2F
→
05/10 19:54, , 3F
CaCl2 便宜又好用！
05/10 19:54, 3F
→
05/10 21:00, , 5F
學校有買CELL期刊的話，去參考這一篇
05/10 21:00, 5F
推
05/10 21:07, , 6F
05/10 21:07, 6F
→
05/10 21:45, , 7F
請問用CaCl2然後heat shock的方式 能轉的plasmid大小上限?
05/10 21:45, 7F
→
05/10 21:46, , 8F
只聽說太大的heat shock不好轉 就要用電的才容易進去
05/10 21:46, 8F
→
05/10 21:46, , 9F
但一直不曉得怎麼樣算太大 多大以上該用電的呢?
05/10 21:46, 9F
推
05/10 22:22, , 10F
10kb以上就算大了吧
05/10 22:22, 10F
→
05/10 23:06, , 11F
CaCl2, if it ain't broken, why fix it?
05/10 23:06, 11F
推
05/12 10:22, , 12F
1.8KV 25uF
05/12 10:22, 12F
推
05/12 10:25, , 13F
heatshock越大效率越低 電的是效率比較高
05/12 10:25, 13F
→
05/12 10:25, , 14F
但是不代表最後結果好
05/12 10:25, 14F
→
05/12 11:41, , 15F
CaCl2我試過26K大小沒問題
05/12 11:41, 15F
推
05/12 14:12, , 16F
不要管那麼多，重點是有菌種讓你能夠進行下一步實驗
05/12 14:12, 16F
推
05/12 14:17, , 17F
樓上，他說要做兩邊的比較，雖然我不曉得為什麼要比較
05/12 14:17, 17F
推
05/13 20:43, , 18F
電流無法穿過去的意思是炸掉了嗎? 你在放菌進去的時候有出
05/13 20:43, 18F
→
05/13 20:44, , 19F
現氣泡嗎? 還有你們是用間距多少的管子去電呢?
05/13 20:44, 19F
‣ 更多 waterbull 的文章
文章代碼(AID): #1DoH05HC (Biotech)