[求救] 關於 Dot blot的操作
最近在做dot blot 不知道版上有沒有人做過
想請教一下 一直做不出很漂亮的圓點 都是周圍深中間淺
而且圓形也有點散掉
我的做法是
nitrocellulose membrane泡過transfer buffer
然後再用PBST wash
接著才放到dot blot(membrane的大小有完全蓋過96well)
membrane下方鋪filter
然後將機器鎖好 開始抽真空
接下來load sample 我是盡量load在well的中心點
load 2ul 4ul 6ul這三種不同量
load完大概5min就將membrane取下
用BSA 1%進行blocking 30min
blocking後加一抗 2hr 之後回收一抗
再用BSA 1% wash 10min 再加入二抗 1hr
二抗結束 wash 30min
然後照ECL看結果
想請問我的作法哪裡有問題？？
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