[討論] 關於 knockdown cell line

看板Biotech作者 (StarRain)時間14年前 (2011/05/04 00:18), 編輯推噓5(5推 0噓 7→)
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重複感染了兩次 使用中研院 RNAi core 那套系統 跑 western blot check 過沒問題 normal 和 scramble 都有訊號 (還蠻強的) knockdown cell line (三株) 則完全偵測不到 但之後有一陣子(約一個月)沒做 所以先把細胞凍起來備用 現在把細胞解凍後已經有一段時間了 不管怎麼跑 western knockdown cell(三株)和正常的訊號都一樣強...囧 是integrate進去的片段被踢掉嗎? 不知道有沒有人跟我一樣發生過這種問題...... 是否只有重新感染才能解決? 請高人指點~ 感激 >"< -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.42.200.106
推
05/04 00:34, , 1F
是否有經過puromycin篩選?
05/04 00:34, 1F
→
05/04 00:34, , 2F
如果你的基因與細胞分裂速度或死亡有關
05/04 00:34, 2F
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05/04 00:36, , 3F
篩過了@ @
05/04 00:36, 3F
推
05/04 00:37, , 4F
可能knockdown後的細胞變成相對弱勢
05/04 00:37, 4F
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05/04 00:37, , 5F
重複感染或是挑clone的方法對您也許有幫助
05/04 00:37, 5F
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05/04 00:39, , 6F
喔喔Q Q 謝謝樓上的建議~
05/04 00:39, 6F
推
05/04 09:56, , 7F
我看來最有可能的是 vector 被 methylated
05/04 09:56, 7F
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05/04 09:57, , 8F
你用的是那種 vector?
05/04 09:57, 8F
推
05/04 10:14, , 9F
puromycin有持續加嗎... 如果是KD oncogene不加很快就沒了
05/04 10:14, 9F
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05/04 18:57, , 10F
vector 是 CMV + MDG + RNAi
05/04 18:57, 10F
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05/04 18:58, , 11F
因為要做毒性測試 所以沒辦法一直加puro耶 Q Q
05/04 18:58, 11F
推
05/10 22:24, , 12F
會掉 趕快做完就好
05/10 22:24, 12F
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