[求救] western總是跑出兩條band
使用的細胞是 THP-1 cells
目的是看藥品能否抑制刺激物誘導 THP-1 cell產生的 MMP-9
不過從開始做到現在每次都會跑出兩條band
(因為 MMP-9 和 b-actin 的距離蠻遠，所以會在加一抗的時候裁成兩半)
照片 http://tinyurl.com/3byyuco
跑電泳會跑 1.5 個小時，先用 100V 跑過上膠，之後再用 120V 跑完
有試過縮短 15 分鐘，band之間感覺很接近，但還是看得出兩條
因為學姐剛買的時候跑過一次，只有一條band
借另外的同學實驗，雖然是不同細胞，但也是只跑出一條
所以自己覺得應該不是抗體有問題
問廠商得到的回應是有可能二抗抓到其他的protein
想請問板上有經驗的板友會跑出兩條band可能的原因
是不是有什麼實驗的細節是我疏忽的？
謝謝~
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.122.74.27
推
04/15 17:21, , 1F
04/15 17:21, 1F
→
04/15 17:21, , 2F
04/15 17:21, 2F
推
04/15 17:47, , 3F
04/15 17:47, 3F
→
04/15 18:44, , 4F
04/15 18:44, 4F
→
04/22 21:51, , 5F
04/22 21:51, 5F