[求救] 如何調取基因?

看板Biotech作者 (無法輸入)時間13年前 (2011/03/02 12:23), 編輯推噓6(6推 0噓 4→)
留言10則, 5人參與, 最新討論串1/1
有個問題想請教 我最近在調取基因 我是抽total RNA轉成cDNA然後參考前人的研究 設計primer夾取基因 希望能夾到從ATG開始到stop codon可以作用的基因 但是經過定序後(跟別人已經釣出來的基因比對) 發現釣到的基因中間都會有intorn 就像這樣 ATG...............(intron)............(intron).........TGA 如果序列去掉intron重新translate 基因看起來似乎可以有作用 但是 我要怎樣把intron去掉拿到CDS的基因呢? 除了從頭做之外，還有其他方法嗎? 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 210.69.175.253
推
03/02 12:36, , 1F
total RNA純化成mrna
03/02 12:36, 1F
推
03/02 14:10, , 2F
DNA 沒有去乾淨吧。如果有 gDNA 殘留就會有 intron。
03/02 14:10, 2F
推
03/02 15:41, , 3F
因為gDNA殘留所以才P到intron，但是裡面應該還是有少量你目
03/02 15:41, 3F
→
03/02 15:42, , 4F
標基因之mRNA~我認為放大出來長度會有所不同，可能你會放大
03/02 15:42, 4F
→
03/02 15:42, , 5F
出兩條band~~其中一條不含intron~但前提是RNA要抽的好
03/02 15:42, 5F
→
03/02 20:32, , 6F
重抽
03/02 20:32, 6F
推
03/03 16:49, , 7F
請問有專一性的primer可以偵測gDNA存在嗎?
03/03 16:49, 7F
→
03/03 16:49, , 8F
最近發現cDNA有gDNA污染 悲劇中...
03/03 16:49, 8F
推
03/03 16:54, , 9F
就不要RT直接PCR就知道有沒有gDNA了
03/03 16:54, 9F
推
03/03 17:11, , 10F
已經翻完了... 用不同的primer放大同一段都會多出~200bp 囧
03/03 17:11, 10F
‣ 更多 stephilow 的文章
文章代碼(AID): #1DRSOreA (Biotech)