[討論] shLuc的細胞可拿來做luciferase的reporter assay嗎?

看板Biotech作者 (等待)時間15年前 (2011/02/26 14:59), 編輯推噓6(6推 0噓 14→)
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目前用的knckdown方式是中研院lentivirus的系統 因為實驗需要做到reporter assay 在review時被committee質疑control組的shLuc應該不能拿來做lucifesrase的reporter 理由是shLuc細胞會一直做出shRNA然後影像到reporter的結果 只是想一想還是覺得很奇怪 reporter實驗中的luciferase蛋白是由前面的promoter和其TF所轉錄的 這樣的話shLuc所製造的shRNA會影響到嗎? 還是說如果shLuc所製造的shRNA若是target位置在coding region才會受影響? 因為有點confused，想請問有這方面的經驗的大家可以提供些意見 若是真的會對reporter有差，想再請問有其他的knockdown control嗎? 謝謝!!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.45.55.135
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02/26 15:05, , 1F
一般來說.shXXX就是指knockdown XXX的shRNA vector阿
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推
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shLuc會摧毀luc mRNA 這樣你的冷光訊號不就一直都很弱?
02/26 15:13, 2F
推
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還有shGFP或是scramble shRNA.
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推
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鄭金松博士曾解釋過，shLuc的序列只是小鼠的一段DNA
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並非真的Luciferase的shRNA，當初只是為了方便命名而已
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要這麼說請提出證據不然會造成誤導，網頁上常見問題以及使
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用者發表都提到pLKO-shLuc是含target luciferase的shRNA
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02/26 17:27, , 8F
shLacz 可以當control
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02/26 18:06, , 9F
鄭博士那樣解釋，實在是......
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02/26 23:51, , 10F
補充一下，我曾經拿wild type細胞跟已經infection過shLuc
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的細胞去做reporter，可是我兩個組別的luciferase real值
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02/26 23:54, , 12F
幾乎沒什麼差，且換算完的RLU也沒啥差異。甚至有時shLuc組
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的RLU還會稍微略高於wild type組，所以看起來冷光值並未如
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icome大說的都很弱耶 =.=a
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推
02/27 10:39, , 15F
網頁上提供的資訊確實是KD firely luciferase...這...
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推
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不行吧，Luc assay很敏感，差一點可以差很多
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推
03/02 00:52, , 17F
如果實驗重複好幾次shLuc都沒效，或許是shLuc設計上的問題
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很多實驗室也有訂，據我所知沒有遇過這樣的問題，建議你
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先確認所使用的確定是shLuc，或許定個序吧沒多少錢
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話說回來設計上有問題機率很小，因為會有很多使用者反映
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