[討論] 農桿菌生化檢測相關及水稻種子 RNA 純化問題~~

看板Biotech作者 (金魚)時間15年前 (2011/02/11 11:22), 編輯推噓1(1推 0噓 12→)
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各位版上的前輩們好 小弟我在實驗上遇到一些問題，想請教一下大家，問題敘述如下： 一、農桿菌生化檢測 挑取生長在 YEP (5 ppm rifampicin) EHA105 單一菌落，培養至 Lactose agar ( 1% lactose, 0.1% Yeast extract, 2% agar)，以本氏液 (50 mM CuSO4.5H2O, 0.5M sodium citrate dihydrate, 0.9 M Na2CO3) 檢測。在 lactose agar 上分成四區劃 不同管 stock 菌液，每一區以 100 ul 本氏液染色，但在菌體周圍無看到黃色環帶 不曉得是哪裡出了問題? 還是哪位大大有照片提供給我參考一下 二、成熟水稻種子 RNA 純化 我是用 5 顆成熟種子以液態氮磨成粉末，加入 1 mL TRIzol 混合，再加入 200 ul 氯仿，以 13000 rpm 離心 15 分鐘，發現種子所含澱粉吸水膨脹，完全無上清液可 取用，請有經驗的大大們提供一下辦法，感激不盡~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.130.87.210
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02/11 15:47, , 1F
你先看一下你自己配的本氏液是不是正常(用糖去測)
02/11 15:47, 1F
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02/11 15:48, , 2F
如果正常,那可能就是菌活性不好or根本不是Agrobacterium
02/11 15:48, 2F
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02/11 15:50, , 3F
以我來說我畫完線養overnight,滴入本氏液30min就很明顯
02/11 15:50, 3F
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02/11 15:50, , 4F
黃色了
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02/11 21:25, , 5F
感謝樓上建議 ^^
02/11 21:25, 5F
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02/13 13:20, , 6F
沒試過TRIzol,不過以前用QIAGEN抽的時候..要把Sample保持
02/13 13:20, 6F
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02/13 13:22, , 7F
在低溫中, 離心的時候也是~~~
02/13 13:22, 7F
推
02/14 00:21, , 8F
第一部分我的經驗是"菌落"本身會變黃色,可以保留一部分
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02/14 00:22, , 9F
菌落不要被本式液附蓋,來對照顏色是否變化
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02/14 00:24, , 10F
第二部分我是習慣加入TRIzol混合後,離心取上清液,
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02/14 00:28, , 11F
再於上清液中加入氯仿混合,你可以試試看
02/14 00:28, 11F
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02/15 22:06, , 12F
謝謝k大提供建議 ^^
02/15 22:06, 12F
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02/15 22:07, , 13F
謝謝 h 大提供建議 ^^
02/15 22:07, 13F
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