[求救] 4% paraformaldehyde的作用???

看板Biotech作者 (owl628)時間13年前 (2011/01/23 14:50), 編輯推噓4(4推 0噓 7→)
留言11則, 6人參與, 最新討論串1/1
這陣子第一次試著做免疫染色 利用4% paraformaldehyde進行固定約15~20分鐘 結果在顯微鏡下看到固定後細胞都變成圓圓小小的 (細胞原本是fibroblast) 問了一下同學他們說paraformaldehyde也會有打洞的效果 但是我查了他都是固定而已,打洞是後面步驟的另一個東西 不知道有沒有人知道為什麼??? 麻煩知道的人可以說明一下,拜託大家了~,謝謝^^ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.168.102.173
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01/23 15:49, , 1F
看 paraformaldehyde 的品質吧~ 純的只有固定效果
01/23 15:49, 1F
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01/23 15:51, , 2F
我老闆不久前才要實驗室換純的，說之前用的不夠純，混有
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MeOH 會打洞，影響到看 glycoprotein。
01/23 15:52, 3F
推
01/23 17:39, , 4F
fixation 跟 perm 是不一樣的東西.. FA/PFA 跟 MeOH 作用原理
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01/23 17:39, , 5F
也不同..
01/23 17:39, 5F
推
01/23 23:14, , 6F
1.PFA是fix不是打洞 2.打洞跟細胞變得小圓的沒直接關係
01/23 23:14, 6F
推
01/23 23:21, , 7F
可能天氣太冷 細胞縮起來了? 先把PFA回溫到25度再做吧
01/23 23:21, 7F
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01/24 16:44, , 8F
謝謝大家的意見~,我的PFA是現配的,所以應該不會太冰之類的
01/24 16:44, 8F
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01/24 16:45, , 9F
學長說是PFA會讓細胞脫水的原因???才會讓細胞變小
01/24 16:45, 9F
推
01/24 19:59, , 10F
PFA in 37 degree C PBS(3.7~4% PFA)
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01/24 20:01, , 11F
FIX at 37 degree C for 15 min
01/24 20:01, 11F
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