[求救] 打斷protein 雙硫鍵的方法
我所研究的protein總共有四對雙硫鍵
已知它和某種cell line有很強的interaction
用點突變和cell ELISA的方法找出的結合位的區域大多與帶正電或疏水性amino acid 有關
目前推測他的三級結構會形成一個groove而與細胞上的ligand結合
因此我想設計實驗把這個三級的結構打亂看是否會影響其與細胞的結合力
但若把整個蛋白用urea 或者 GuHCl整個denature怕之後protein會沉澱
所以想用比較溫和的方式加入還原劑打斷雙硫鍵就好
但又要考慮這個還原劑是否對細胞會有毒性
目前考慮的是先在蛋白中加入reduced glutathione然後再把buffer置換掉
再來做MTT看是否對cell有毒性 之後再做cell ELISA
目前想到能做的大概就是這樣 但總覺得不夠完善
想請各位前輩指點一下 是否還有其他的方法
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◆ From: 140.114.100.164
※ 編輯: duck00192 來自: 140.114.100.164 (01/19 02:51)
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