[求救] 農桿菌transform

看板Biotech作者 (絕心忘情)時間13年前 (2011/01/08 22:08), 編輯推噓3(305)
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最近在進行將一個construct好的plasmid 利用電穿孔的方式轉入農桿菌 之後在進行植物的感染 但是 作幾次下來 plate上確實會長出colony 第一次挑菌作colony PCR可以做出我要的band 但是之後再把同樣的菌落拿去塗盤 長出的colony卻無法PCR出我要的band 這就表示那顆菌落是假的 我一次大概都會挑十幾顆來check 但是卻都無法挑到正確的colony 基本上我已經將所有可能污染的因素排除 但仍是一樣的結果 請問版上有版友遇過類似的情形嗎 P.S. 我用的抗生素是kanamycin vector是pCambia2300 農桿菌的品系是LBA4404 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 218.35.25.28

01/09 20:06, , 1F
都是做colony PCR嗎? 電穿孔的condition有調過嗎?
01/09 20:06, 1F

01/09 20:07, , 2F
PCR是雜band還是沒band?
01/09 20:07, 2F

01/09 21:08, , 3F
電穿孔的condition沒啥問題 PCR是沒有band
01/09 21:08, 3F

01/10 06:11, , 4F
用pCambia上面的primer site試試看? sequence看看
01/10 06:11, 4F

01/10 06:12, , 5F
會不會是運氣太好double cross out出來了XD
01/10 06:12, 5F

01/17 13:25, , 6F
這種事我都還沒發生過ㄟ...你抗生素有加兩種嗎?
01/17 13:25, 6F

01/17 13:27, , 7F
LBA4404內還有一個抗生素的篩選基因...
01/17 13:27, 7F

01/27 14:39, , 8F
多加個Streptomycin篩篩看吧
01/27 14:39, 8F
文章代碼(AID): #1DA6_9SY (Biotech)