[求救] His tag 純化

看板Biotech作者 (草泥馬在心中奔馳)時間15年前 (2011/01/04 17:57), 編輯推噓5(504)
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以前利用細菌表現蛋白在用 His tag純化 都很OK~ 最近 再利用cell line 大量表現蛋白後 再利用His tag純化 但出現的問題是 純化不到或是純化出來的量很少 請問有人有做過相關的實驗嗎? 也許利用cell line表現出來的量不足以 利用his tag 純化出來 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.213.170

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沒有先測測titer,或是作作western,看是沒抓到還是沒表現
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01/04 18:41, , 2F
每次都有測試 確實有表現出目標蛋白
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01/04 19:09, , 3F
用cell line表現的量一定很少阿 不可以跟E. coli比~
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01/04 21:36, , 4F
少是一定的 但完全看不出什麼耶 哪種蛋白&少是數值是多少?
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01/04 22:10, , 5F
正常 用mammalian cell收純化蛋白要養很大量很大量
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01/04 22:31, , 6F
cell表現量低很正常
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01/04 22:32, , 7F
是stable還是transient? stable的話量應該會比較少
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01/06 10:46, , 8F
印象中His-Tag抗體普遍很爛
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cell表現少很正常
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