[求救] RNA level和WB的結果兜不起來
最近用四株cancer cee lines(暫命名為為A、B、C、D)在看一個chemokine receptor
一開始我先用Q-PCR去分析四株cell lines receptor的表現量
Ct值分別約為
A:32
B:24
C:32
D:32
後來我用WB去check protein的表現量
壓出來的結果竟然是A、B、D表現量差不多，甚至D細胞的表現量更比B細胞來的多
老闆對於這樣的結果很不滿意，但我壓了好幾次，RNA跟protein的結果就是兜不起來
我也查過GOOGLE，試圖尋找其他paper也是用D細胞來做WB，但沒有任何結果
實在不知道是哪裡出了問題???
我推測的可能原因會不會是我WB看的位置根本就是錯的??
我查過NCBI該receptor的資訊，確實他有兩個isoform a和b，但兩分子量差不到1kD
Ab datasheet 所看的band大約是在43kD，實際上我看到的位置是介於marker 43-55中間
而那家抗體的網址中也有一些reference看的位置跟我的是比較接近
反而不像datasheet中那麼剛好就在43的位置上
這讓我更陷入疑惑中.........
我也無法跟老闆解釋為何Ct值32的結果，protein的表現量卻那麼高......
希望有遇過這樣經驗的人或是各位大大能一起討論!!!非常感激!!!!!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
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