[閒聊] 跑電泳經驗分享

看板Biotech作者MrCAKE (Keep Working)時間15年前 (2010/11/24 15:54)推噓2(2推 0噓 2→)

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看到版上有人問抽DNA、RNA及跑電泳的問題在此拋磚引玉一下我不是啥強者只是一般量產型的碩士生板上很多強者應該可以狂電我不過跑過的膠也有接近千片可以小小分享一下電泳的經驗因為已經畢業兩年多了對實驗的印象有點糢糊有錯誤的地方也請鞭小力點XD 我比較擅長的是抽菇類gDNA 抽大量(300ug-1mg)時用傳統方法 sample數多但只需小量時用kit抽不過我的實驗材料用傳統方法抽起來品質較好所以以下的圖都是用傳統方法抽的我的sample含有很多醣類所以沒純化乾淨的話跑起來會很醜 http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630546&p=0 相對的狀況較好時就算一次loading很多也OK http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630547&p=1 在gDNA旁的marker通常只是為了預測濃度大小是不準的 (要知道gDNA的確實大小要跑PFGE) 而plasmid的大小在沒切成linear前也不準 (圖中是約20-40kb的cosmid，一般KIT或傳統方法抽起來都差不多) http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630549&p=2 跑plasmid或較大片段的PCR amplicon時要用1-10K或更大的marker (圖中為5.7k及3.7K的PCR產物) http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630550&p=3 RNA變性電泳(這張圖是try濃度時跑的，不過要注意，由於pipette的誤差， loading到0.5ul以下時的濃度是不可信賴的，不管哪個牌子的pipette都一樣) http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630551&p=4 RNA也可以用一般非變性的DNA gel來跑 http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630552&p=5 跑大量sample時，多插幾排comb可以省時間也省錢(不過前提為片段大小不用太精準) http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630553&p=6 如果不想用polyacrylamide gel，較高解析度的agarose在適當條件下也可以分離僅差10bp以下的片段 http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630554&p=7 沒有marker可用時我都會自製marker...... http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630555&p=8 最後送給大家這張圖 http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630556&p=9 實驗不可能永遠不失敗但是痛苦過後還是要繼續撐下去 (我也曾經同一個實驗卡住一年半每天看結果只想罵幹) 做不出來多問問有經驗的學長姐或其他實驗室的人會比自己亂try有效很多不排斥的話可以上國外論壇爬文 http://www.protocol-online.org/forums/ http://molecularbiology.forums.biotechniques.com/ 這是我最常用的兩個有關實驗技巧的資料非常豐富幾乎都能找到解答而且外國學者都很nice 所以我後來也註冊了帳號有不懂的就去上面問問題XD 希望這篇文章能夠幫助到一些人~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 124.8.75.189 ※ 編輯: MrCAKE 來自: 124.8.75.189 (11/24 15:55)

推

david6602ok

11/24 16:30, , 1^F

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MrCAKE

11/24 16:38, , 2^F

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MrCAKE

11/24 16:42, , 3^F

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