[求救] 我的PCR有Negative control的問題?

看板Biotech作者kutoushinji (黑嚕嚕)時間15年前 (2010/11/22 05:08)推噓8(8推 0噓 18→)

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各位大大我最近跑PCR的negative control都會有band，我們實驗室其他人也都遇到一樣的問題而且band的大小每個人都不一樣，都剛剛好跟自己主要sample P出來的大小一樣我試了一些方法想找出原因，但是結果越來越奇怪我先說明一下大致的方法：我的negative control是用DDW(滅過菌並分裝)當template 兩股primer也都會從stock中分裝出來，primer夾出來片段的大小約900bp Taq酵素的使用非常頻繁，應該不會有汙染的狀況 ------------------------------------------------------------------------------ 實驗的材料做一個說明我的DDW分為舊DDW(原本使用的)及新DDW(新分裝到tube中) primer分為舊primer及新primer ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 第一個實驗：有加我的樣品一起跑，但是NC都是先加的 NC:舊DDW+舊primer 結果：NC跟我的樣品跑出一樣大小的band ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 第二個實驗：純粹跑舊DDW+舊primer (不加其他sample) 跑11管結果：全部都有大約900bp淡淡的band ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 第三個實驗：有舊DDW.新DDW+舊primer.新primer sample 結果(O.X) O代表有band;X代表沒有band ——————————————————— 1.舊DDW+新primer F+R X 2.舊DDW+新primer F X 3.舊DDW+新primer R X 4.舊DDW X 5.新DDW X 6.新DDW+舊primer F+R O 7.新DDW+新primer F+R O 所以懷疑是新的水有汙染 ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 第四個實驗： sample 結果 ————————————————— 1.舊DDW+舊primer F+R X -與第1.2次實驗不符 2.舊DDW+新primer F+R O -與第3次實驗不符 3.新DDW+舊primer F+R O 4.新DDW+新primer F+R O ------------------------------------------------------------------------------ 真的非常感謝耐心看完以上內容的大家我寫的不知道大家有沒有了解如果看懂我打的內容，希望可以給我一些建議因為要做分析實驗，所以需要NC 如果解決不了，其他的data都不準確拜託!!拜託!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.227.162.43

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