[討論] SDS-PAGE dye轉黃&跑不動的問題

看板Biotech作者 (乎哩乎哩￾ N￾ N￾ )時間13年前 (2010/11/12 22:06), 編輯推噓4(4推 0噓 19→)
留言23則, 7人參與, 最新討論串1/1
我們家用的是垂直電泳 跑SDS-PAGE時經常會遇到dye跑到底部就變黃 然後再也跑不動的情況 這個老症頭總是聽說因為底部pH變掉 導致dye(pH indicator)變色 應該也有很多人遇過 (電壓150V,有冷卻系統) 而且不是均勻的變色 總是有某一區會比較早 在繼續跑的會 其他未變色的位置就會跑超過黃色條帶 整個跑歪就無法比較大小 目前作法是一轉黃色就停止電泳 避免不同well跑的距離不同 但最近變色出現的時間實在太早了 離跳海還有1.5cm以上的距離 停止電泳的話 band的分離效果就不夠好 但爬文結果大家總是說pH導致dye變色 而pH不對 glycine base的page也跑不動了 檢查過stacking 與separating 的tris buffer 還有running buffer, sample buffer pH與濃度都是正常的 就算換新或重配都是一樣的結果 僅知道pH變了 但最終還是得解決這個惱人的問題 不知這個有沒有人有方法可以解決? 曾經有人提過可能是APS的問題 不知這個原因&破解法該如何呢? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.80.100
推
11/13 15:17, , 1F
每一樣都逐一檢查 包括配製用的水和電泳槽
11/13 15:17, 1F
推
11/14 22:13, , 2F
Running bfr. 應該是主因。你要check bfr. 和milli-Q
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11/14 22:13, , 3F
的pH值....
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11/14 22:14, , 4F
如果Running bfr. pH is OK, 那有可能是水的問題。
11/14 22:14, 4F
推
11/15 14:59, , 5F
買現成的sample buffer試試
11/15 14:59, 5F
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11/15 16:37, , 6F
第一個我會想到你的 pH meter 是不是可以校正 tris
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11/15 16:41, , 7F
http://ppt.cc/V3uQ 第二頁中間有介紹電極的種類
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11/15 16:44, , 8F
因為 bromophenol blue 要轉黃的 pH 值還蠻酸的 約3.0
11/15 16:44, 8F
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11/15 16:45, , 9F
一般電泳的時候不用冷卻系統的情況下 溫度會小小上升
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11/15 16:46, , 10F
這會讓 tris 的 pH 稍稍降低 約 7 點多 可是我們的 tracking
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11/15 16:46, , 11F
dye 都還是藍色的
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11/15 17:44, , 12F
膠會產生皺摺嗎?
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11/16 00:10, , 13F
to Zec: running buf是配10X的stock 使用前稀釋成1X
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11/16 00:12, , 14F
稀釋完會再調pH值 水的話..是有"稍微"偏鹼一點.只有一點
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11/16 00:17, , 15F
to Anvec: pH meter還真的不知道是哪種電極..便宜貨就是
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但這隻電極平常有在校正和測量tris buf.以外的東西
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11/16 00:19, , 17F
應該是不會偏差太大...明天在關注一下
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11/16 00:20, , 18F
但若如您所說bro. blue轉黃色要pH 3那還真是極端
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而跑膠啟始時還是藍色 一值到接近最底下才變黃色
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電泳有用冷卻系統 溫度都滿低的 應該不至於讓tris pH改變
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11/16 00:24, , 21F
to kcc:膠沒有皺褶 但膠用CBR染色後 變色的dye會被染色
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11/16 00:25, , 22F
國外論壇有提到glycine耗盡的可能 但我不出原理是啥@@
11/16 00:25, 22F
推
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把sample補一點tris看看?
11/16 00:45, 23F
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