[求救]Cell replate 細胞陣亡
各位前輩好!
在下最近在學習神經細胞的replate實驗
我的protocol大約是這樣:
先Agg/RA 4天
-> culture dish
用預熱過的poly-L-lysine coating過10min(用於replate)
把Agg的細胞加入trypsin 2ml
然後Pipeting 5 下打散
-> shake 1min
-> 再Pipeting 5下
->加入media中和trypsin
->Pipeting 5下 然後離心1000rpm 3min
->數細胞
-> Pass 5.6x10六次方到100mm culture dish中
-> replate 後 1天(replate D1)加入ara-c 以抑制glial cell的形成
-> replate 後 2天(replate D2)換成不含ara-c的fresh media
-> 之後每2天換一次fresh media
-> replate D6的時候收protein
但是我發覺每次的Agg cell都沒有很圓
然後我的replate cell 之後都死很多細胞(很多都飄起來)
難道是我的Poly-L-lysine coating得不夠嗎?
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