[求救] RT-PCR的一些小細節

看板Biotech作者 (BLUE)時間15年前 (2010/10/17 15:42), 編輯推噓6(6推 0噓 7→)
留言13則, 8人參與, 最新討論串1/1
最近在做RT-PCR想看sample間基因大概的表現量差異 我第一次PCR是做26cycles 老闆說cycle太高了會看不出差異 所以我又降為24cycles 之後拿去跑膠 我用小comb去跑 sample:dye 1:5 (合計6ul) 感覺似乎太多了 都會滿出loading site (不知道這樣會不會影響到裡面DNA的量) 前面是一些雜言 我想問的是 該注意哪些小地方 才能清楚的看清sample間的差異 例如sample跟dye的比例該怎麼調整 and EtBr的作用時間長短該多少 (抱歉敘述能力不好 希望有大大看得懂我的問題 感謝) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.128.67.246
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10/17 17:52, , 1F
為何不用qPCR來定量？
10/17 17:52, 1F
推
10/17 20:34, , 2F
跑qPCR就可以了啊～
10/17 20:34, 2F
推
10/17 23:06, , 3F
這種好像跑qPCR的data才能夠人家相信..話說回來.印象
10/17 23:06, 3F
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10/17 23:07, , 4F
中純粹RT-PCR看差異..你可能要先抓還在log期的cycle
10/17 23:07, 4F
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10/17 23:07, , 5F
畢竟一到plateau期..你看的東西就不準了
10/17 23:07, 5F
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10/17 23:07, , 6F
sample跟dye的比例不是直接看你的dye是幾倍的就照倍數
10/17 23:07, 6F
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10/17 23:08, , 7F
跟sample混就好?
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10/17 23:55, , 8F
try 不同cycle數 18 20 22 24 之類的...
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10/18 01:26, , 9F
google: semi quantitative (RT)-pcr 或 半定量
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10/18 07:57, , 10F
qPCR啦 RT不好做quantitative
10/18 07:57, 10F
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10/18 09:12, , 11F
如果dye是6x 應該是sample:dye = 5:1 吧
10/18 09:12, 11F
推
10/18 10:48, , 12F
dye不會影響EtBr後的亮度 只是讓它不要飄 多一點無妨
10/18 10:48, 12F
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10/19 22:13, , 13F
我跑30個CYCLE耶!
10/19 22:13, 13F
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