[求救] PCR primer gc% 太低怎麼辦

看板Biotech作者 (joy)時間15年前 (2010/10/14 18:56), 編輯推噓3(302)
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想請問各位大大 如果要設計primer的位置大部分都是at 要如何增加gc% 要p cDNA 從ATG開始 但是設計PRIMER的 GC值 只有34% 如果延長長度 由於後面有更多的AT 所以數值會越來越下降 想請問 要怎麼解決 或者P不出來是因為 這個cDNA是自己抽mRNA 轉的嗎 我的大小大概有2k左右 謝謝!!! 發問時請注意,若是要問實驗相關的問題,請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.52.34

10/14 21:15, , 1F
那我會只考慮Tm值 GC低還好 GC太高比較難搞
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10/14 22:38, , 2F
同上,多做幾個nt到Tm值高一點
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10/15 20:45, , 3F
那請問一般Tm的考量有哪些呢 可以分享一下嗎
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10/16 15:46, , 4F
樓上指Tm值嗎? 一般PCR我習慣抓55-65之間 許多產品目錄都
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10/16 15:47, , 5F
有PCR的原理說明 可以參考看看
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