[求救] E. coli蛋白質表現

看板Biotech作者時間13年前 (2010/10/13 23:10), 編輯推噓4(4推 0噓 6→)
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各位高手好，小弟想請教幾個問題 我現在用E. coli BL-21這支expression host表現plasmid pET-28a 使用IPTG-induction，因為實驗室沒有人做過我insert的基因的相關資料 所以養到O.D.=0.4~0.6時加入IPTG，大概培養多久時間收? 第二個問題是現在不知道蛋白質表現會在細胞哪個部位? 不太可能是胞外蛋白，有可能是胞內可溶性或inclusion body或membrane protein 我想先把表現完的菌液先離心，上清留存，pellet回溶，但是不知道用哪種buffer? 接下來應該是一步一步離心，收pellet和supernatant 詳細的步驟請教有經驗的高手，拜託大家了，感謝!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 111.249.183.206
推
10/13 23:48, , 1F
read the pET manual book plz
10/13 23:48, 1F
推
10/14 02:14, , 2F
你是該看看手冊,另每種蛋白質性質歧異很大,表達參數也差很大
10/14 02:14, 2F
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10/14 02:14, , 3F
你得自己在這邊做功課去找你的蛋白最佳解,別人給不了答案的
10/14 02:14, 3F
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10/14 09:48, , 4F
你是用 BL21 還是 BL21(DE3)?
10/14 09:48, 4F
推
10/14 15:51, , 5F
這種表現蛋白質的問題應該要自己是條件 別人用的條件不一
10/14 15:51, 5F
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10/14 15:52, , 6F
定適合你的蛋白質 可以看你們實驗室之前用的條件 自己再慢
10/14 15:52, 6F
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10/14 15:52, , 7F
改
10/14 15:52, 7F
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10/17 11:14, , 8F
molecular cloning可以參考看看 有測試條件的protocol
10/17 11:14, 8F
推
10/19 04:16, , 9F
1.請做對照組比較, 2.最適反應條件自己抓, 可參考別人的.
10/19 04:16, 9F
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10/19 04:17, , 10F
3.請把你構築的目的看懂, 還有你的合成蛋白有無Target Seq.
10/19 04:17, 10F
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