[求救]鬼打牆PCR完全作不出來

看板Biotech作者時間15年前 (2010/10/13 07:59), 編輯推噓5(508)
留言13則, 6人參與, 最新討論串1/1
本來我的PCR條件都還算穩, 因為要離職了,所以最近一直在趕著補DATA 結果上上星期實驗室4度冰箱突然壞掉, 我趕快把放裡面的DNA,和一些藥(鎂離子溶液,buffer...) 救到-20度冰箱(4度冰箱溫度升到18度,東西約在裡面放了1小時) 然後之後PCR就完全做不出來了 情況有兩種,有時是什麼東西都做不出來 有時是做出不是我要的東西(目標產物200bp,跑出300和400bp的band各一條) 不同組primer都出現類似情況 我以為是有藥壞掉,所以能換的東西都換了 從dNTP,水,buffer,taq, primer也買了新的 只差樣品沒辦法換新的 但是我有試過拿之前留在-20度冰箱的備用樣品來做,結果還是一樣 會出現這類狀況是為何? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.169.214.230 ※ 編輯: fc01 來自: 118.169.214.230 (10/13 08:05)

10/13 08:22, , 1F
會不會其實之前成功的data是假象??
10/13 08:22, 1F

10/13 08:23, , 2F
但你的PCR結果又不是很穩定,要嘛都沒有,怎麼會時有時無?
10/13 08:23, 2F

10/13 08:36, , 3F
12組primer,各做600多個樣品,是假像我就認了
10/13 08:36, 3F

10/13 08:40, , 4F
我是有懷疑壞的是PCR機,可是其他人用是好的
10/13 08:40, 4F

10/13 09:07, , 5F
每次都有做negative control看看嗎?
10/13 09:07, 5F

10/13 09:10, , 6F
有,很乾淨該沒東西就沒東西
10/13 09:10, 6F

10/13 09:29, , 7F
去拜拜.........
10/13 09:29, 7F

10/13 18:06, , 8F
曾經遇過PCR機器有問題的~因為用別台P出來的結果都很穩定
10/13 18:06, 8F

10/13 18:07, , 9F
因為那台PCR機器,就連最好P的質體的M13F/R都時有時無
10/13 18:07, 9F

10/13 18:08, , 10F
然後阿~我對自己的PCR技術很有信心~所以是機器溫度怪怪的
10/13 18:08, 10F

10/13 18:08, , 11F
看你要不要換台機器看看啦
10/13 18:08, 11F

10/14 21:20, , 12F
PCR機器有問題.....
10/14 21:20, 12F

10/15 14:39, , 13F
PCR說簡單 但有時候做不出來就是做不出來...
10/15 14:39, 13F
文章代碼(AID): #1CjFPN9M (Biotech)