[求救] 蛋白質二維電泳
最近剛剛接觸二維電泳
目前使用的是GE IPGphore3的機器
有些實驗操作的地方想請問各位
1.我在配置equlibration buffer的時候所使用的配方如下:
Urea 72.07 g 6 M
1.5 M Tris-HCl, pH 8.8 6.67 ml 50 mM
Glycerol 60 ml 30 %
ddH2O 補到200 ml
SDS (FW 288.38) 4 g 2 %
但是配完後(常溫)拿去4度中冰起來
隔天發現底下會有一團白色黏稠物沉澱
可是前人留下來的buffer卻非常清澈(也是4度保存)
這是為什麼呢?
2.在進行IEF電泳時我應該如何調整電泳的program呢?
我目前在作的是將老鼠的血液抽出後
至於4度中凝集 於離心後抽取血清
將sample與rehydration buffer混合後進行passive rehydration
之後再進行IEF
那我應該如何調整program呢?
裡面寫的gradient與另外一個固定電壓的 又該用在哪個步驟上?
3.跑完IEF後會在STRIP上發現有微微的焦痕
向別的實驗室請益後得知
可以在電極的地方墊上濾紙
可是這樣濾紙要先吸收SAMPLE還是rehydration buffer?
如果要更換濾紙那不是就會讓礦物油沾到電極?
請問板上的各位以上的問題我該如何改進呢?
謝謝
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