[求救] 如何證明某A蛋白能直接活化某B蛋白

看板Biotech作者 (幾家歡樂幾家愁)時間13年前 (2010/10/12 01:24), 編輯推噓3(3推 0噓 11→)
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Meeting的時候老師丟了一個問題給我 在訊息傳遞中假設 A → B → C 首先我利用了 B 的siRMA konck down B了~ 可以發現 C 的磷酸化已經受影響了 然後我說 B 會去影響 C 可是老闆說要我證明 B 會去直接活化 C 然後我就跟他說做IP嗎?? 他就說不是 ...叫我回家查方法 請問各位大大是要如何證明 B 會直接活化 C 呢? 他說你用 B 的siRNA 抑制會影響 C 沒錯 ...... 但中間搞不好還有個 D 參與阿 A → B → D → C (這樣) 所以要我直接證明 B 活化 C >"<.... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.62.252.87
推
10/12 08:52, , 1F
1.OE B看c-p增加 2.in vitro kinase assay
10/12 08:52, 1F
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10/12 08:53, , 2F
3. IP我覺得也沒錯阿 前提是complex剛好被你抓下來
10/12 08:53, 2F
推
10/12 09:01, , 3F
推樓上的in vitro kinase assay.
10/12 09:01, 3F
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10/12 13:44, , 4F
我覺得以上都可行= =
10/12 13:44, 4F
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10/12 15:53, , 5F
如果B只是個adaptor protein IP還是沒辦法直區別B C的關係
10/12 15:53, 5F
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10/12 15:54, , 6F
in vitro kinase assay比較能直接證明BC的關係
10/12 15:54, 6F
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10/13 01:42, , 7F
推 in vitro kinase assay
10/13 01:42, 7F
推
10/13 09:52, , 8F
in vitro kinase assay後面還有combo拳...
10/13 09:52, 8F
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10/13 09:53, , 9F
Boss:你這是試管內反應 濃度調高一點半塞變硬塞
10/13 09:53, 9F
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10/13 09:53, , 10F
你要如何證明細胞內也是同樣的反應呢?
10/13 09:53, 10F
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10/13 09:55, , 11F
反正KO and OE->in vitro assay->in vivo IP or mut
10/13 09:55, 11F
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10/13 09:55, , 12F
幾乎快變SOP..
10/13 09:55, 12F
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10/13 10:05, , 13F
或者去做oe bc的FRET (然後又被reviewer挑毛病 endo
10/13 10:05, 13F
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10/13 10:05, , 14F
的在那？ Zzzzz
10/13 10:05, 14F
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