[方法] 免疫染色抗體可用稀釋倍率範圍?

看板Biotech作者 (好魚)時間13年前 (2010/09/26 18:21), 編輯推噓2(202)
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大家好 敝人在做免疫染色時 用的是 Santa Cruz 的抗體 Santa Cruz 說明書上說 這支抗體在免疫染色可用的稀釋範圍 是 1:50 - 1:500 而建議起始稀釋由 1:50 開始測試 於是我遵照說明書的去做 測試結果似乎是不錯而且有染到目標物(神經細胞核) 但因為 1:50 實在太耗抗體 而且有 paper 作者告訴我說 他用同一支貨號抗體,1:1000 稀釋也染出來 於是老闆就叫我用同一批組織 下次測試 1:250 和 1:1000 的結果 如果較高稀釋倍率可以做出同樣水準結果的話,以後就可以這樣做 然後他要我告訴他,免疫染色定量 該用什麼方法判別 1:50 、 1:250 、 1:1000 之間染出來效果的差異 我想得到的只有去數細胞核數目 還有計算特定區域面積下的細胞核密度 請問有沒有這方面的前輩可以告訴我貴實驗室用的方法 或是介紹一些連結我可以參考的 還是就真的只是這兩種? 我老闆強調要 scientific ,不過我覺得不懂他 scientific 的標準在哪 如果他早就知道這種定量的方法,就不會要我去找給他了 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 220.132.126.121

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一般就是有染上的細胞比例(%)、訊號強度(用軟體計算)還有
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看cellular localization有沒有改變吧
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我的一抗都是1:200,二抗1:100(不能再多了!)
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太濃會導致background signal太高 不是越濃越好
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文章代碼(AID): #1CdnwWYJ (Biotech)