[求救] mutagenesis有辦法插13個nucleotides進 …

看板Biotech作者 (FENOR)時間13年前 (2010/09/23 13:10), 編輯推噓3(3推 0噓 7→)
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最近做了一個clone，在最尾端的地方出現了一個很怪的現象， 就是最尾端40nt，只做出了其中27個，然後沒做出來的13個是卡在正中間。 primer的原始設計是涵蓋了從尾端數來的22個加上restriction site 10個BP。 這樣的話可以用mutagenesis把loss掉的13個給補進去嗎? 因為之前做mutagenesis都是以點突變為主，還沒有碰過這樣的， 懇請先進賜教 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.135.172 ※ 編輯: FENOR 來自: 140.112.135.172 (09/23 13:11)
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09/23 13:40, , 1F
可以 我作過插進35 bp的..不過你這情形是不是多挑幾個
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09/23 13:40, , 2F
比較好
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09/23 13:41, , 3F
其實是因為每次長都只長一顆...剛好這顆就有中
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09/23 13:41, , 4F
我總共transform三次，剛好三顆colony
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推
09/24 08:43, , 5F
請問a大是用quikchange插35bp的嗎?
09/24 08:43, 5F
推
09/24 08:52, , 6F
嗯嗯
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推
09/24 11:14, , 7F
請問有什麼技巧嗎? 因為我看quikchange manual
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09/24 11:15, , 8F
裡面說不建議做太長的insertion 我之前要放一段差不多大小
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09/24 11:15, , 9F
的片段也都放不進去 囧
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10/03 18:10, , 10F
有時候還是要看你序列的特性：迴文、亂黏等都不好。
10/03 18:10, 10F
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