[求救]關於Western SDS-page之gel製作的問題

看板Biotech作者 (快活似神仙)時間13年前 (2010/08/28 15:46), 編輯推噓3(3022)
留言25則, 8人參與, 最新討論串1/1
請問為什麼我做的SDS-PAGE跑起來, 在Running Gel的中間會有分層呢? 我是用bio-rad的gel running system,玻璃中間厚度是1.0mm的mini gel, 我之前原本跑得好好的, 忽然有一天跑的時候發現我的protein marker卡在running的中間下不來, 仔細一看會發現gel中間有一個很直的分層(平行於桌面)在那裏, 而所有約三十幾以上的marker就都卡在那條線上了, 之前有和bio-rad的工程師討論,他說有可能是Gel凝膠的問題, 他要我減低TEMED的量,且要我gel只要上下搖晃一下就可以加了(避免氣泡影響凝膠), 但是我跑了以後還是一樣會有分層出現, 想請問一下各位高手還有甚麼改進的可能性嗎? 感謝囉~~~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.119.180.95 ※ 編輯: trp9999 來自: 140.119.180.95 (08/28 15:47)

08/28 17:41, , 1F
下膠凝固後 再加上層 gel 間隔時間太久 下膠接觸空氣
08/28 17:41, 1F

08/28 17:42, , 2F
結果有點乾掉? 我只想到這個 冏
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08/28 18:07, , 3F
樓上@@? 不是有異丙醇嗎 也會接觸到空氣喔
08/28 18:07, 3F

08/28 18:09, , 4F
我是指去掉水或異丙醇到加上層gel的時間 XD
08/28 18:09, 4F

08/28 20:19, , 5F
元po是說running gel的中間吧?
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08/29 23:12, , 6F
marker卡在那條線上 那sample也有卡住嗎??
08/29 23:12, 6F

08/30 13:08, , 7F
sample應該也是有卡住
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08/30 13:08, , 8F
之前想說是不是marker的問題,但是我跟其他的實驗室借marke
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08/30 13:09, , 9F
借marker來跑還是一樣
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08/30 20:38, , 10F
要不要用更高%的gel來試試看?? 你是買已經混合好的配方嗎??
08/30 20:38, 10F

08/30 21:00, , 11F
我有遇過這情形 用到14%還是會有分層現象
08/30 21:00, 11F

08/30 21:35, , 12F
isopropanol沒洗乾淨? 上膠凝太久拔COMB拉起來?
08/30 21:35, 12F

08/31 10:45, , 13F
確定是膠有斷開?還是只是跑到一半跑不下去?tracing dye呢
08/31 10:45, 13F

08/31 10:48, , 14F
若膠斷開 檢查一下玻璃看看.若跑不下去 檢查buffer
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08/31 10:49, , 15F
running buffer不知道你會不會reuse 會的話用新的跑看看
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08/31 21:17, , 16F
gel拿起來是沒有斷掉 只是好像那條線上下濃度不一樣?
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08/31 21:18, , 17F
buffer是用新的 東西還是會跑下去
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08/31 21:18, , 18F
只是到那條線的時候會卡很久
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08/31 21:19, , 19F
等到30以上的marker都卡成一條線了才跑下去= =+
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08/31 21:22, , 20F
to iuy不知道你到最後是怎麼解決的呢~
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09/01 11:50, , 21F
首先請問你要看多少kD的protein?
09/01 11:50, 21F

09/01 11:51, , 22F
我到最後還是沒有完全解決 但是拿跑出我要看的東西就好
09/01 11:51, 22F

09/03 10:31, , 23F
40~75kD之間
09/03 10:31, 23F

09/03 10:34, , 24F
意思是說在分層之前就把要的東西分開囉?
09/03 10:34, 24F

09/03 16:11, , 25F
我的情況是讓膠繼續跑 那條分層就會往下移動 就可以分開
09/03 16:11, 25F
文章代碼(AID): #1CUBxWuv (Biotech)