[求救] mismatch PCR

看板Biotech作者 (柚子)時間15年前 (2010/08/27 00:06), 編輯推噓1(1推 0噓 4→)
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最近再P一個point mutation 的基因 以paper的primer 做PCR 都可以P出產物 如果是mutation 就會有該酵素切位 可沏出不同大小的片段 但問題是 酵素切割都切不出來 是過不同牌子相同的酵素 也無法切出 但確定該病人 是該疾病點突變 想請問: PCR 產物 要先純化後再切割或將切割總體積放大(PCR reagent會影響酵素切割) point mutation PCR是否要用proffreading 的Taq做PCR 因為是point mutation 所以有hetroligus的問題? 有可能P到是normal的一端 但很多篇paper都是用相同的酵素切割 該基因 都可以切出 感謝!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.25.118.160
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08/27 00:18, , 1F
請問你有 postive control 嗎？
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08/27 00:26, , 2F
不算有，但我拿來做的sample是已經確診的病人了
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在實驗的嚴謹上，你應該要有postive c. 這樣才可以幫你解
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決問題
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推
08/27 01:41, , 5F
同意樓上 另外你說的是heterozygous嗎?
08/27 01:41, 5F
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