[求救] 造成透析時蛋白質沉澱的原因

看板Biotech作者 (小蛙)時間15年前 (2010/08/17 16:25), 編輯推噓2(2推 0噓 3→)
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小妹的蛋白質為inclusion body 所以必須用8M urea回溶 再來利用Ni resin純化 收集elute出來的sample 接著用dialysis的方式將urea和imidazol稀釋 我的方式是從5M urea開始降 每次降1M 一直降到3M都OK 不過從3M往下降就會出現沉澱的現象 (sample由澄清變成混濁) 一次降0.5M也是會沉澱 不知道有哪些因素可能造成蛋白質沉澱 小妹應該從哪個層面下手 解決這個問題呢 dialysis buffer的pH值會影響嗎? 還是蛋白質dialysis的過程中本來就會有部分摺疊錯誤? 因為以前完全沒有做過透析 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.49.159
推
08/17 19:32, , 1F
不是每個蛋白都能在urea濃度遞減中refolding
08/17 19:32, 1F
推
08/17 19:35, , 2F
也許可以降低IPTG的濃度或是降低INDUCTION的溫度並延長時間
08/17 19:35, 2F
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08/17 19:35, , 3F
一開始就儘量得到soluble form
08/17 19:35, 3F
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08/17 19:37, , 4F
另外，也可以在urea濃度遞減中添加0.1M NaCl是否增加溶解度
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08/17 19:37, , 5F
以上只是個人淺見 相信中研院會有更多的人提供您諮詢
08/17 19:37, 5F
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